O vírus da hepatite B (HBV) infecta cronicamente aproximadamente 250 milhões de pessoas em todo o mundo, e faltam terapias curativas confiáveis. Uma compreensão mais ampla das interações vírus-hospedeiro pode acelerar os esforços para encontrar novos alvos terapêuticos centrados no hospedeiro. No entanto, sistemas de cultura celular ineficientes e marcadores de replicação limitados compatíveis com a triagem combinada impediram o uso generalizado de telas de perturbação genética. Aqui, realizamos o primeiro teste noturno (KO) do CRISPR-Cas9 agrupado em todo o genoma com infecção autêntica por HBV e integramos esses resultados com duas telas agrupadas ortogonais para identificar os fatores do hospedeiro. Selecionamos 72 genes para uma avaliação em várias etapas, incluindo ensaios de validação organizados usando infecção por HBV e transfecção de pgRNA. Em seguida, testamos de forma independente treze genes usando experimentos de KO em massa de alta eficiência para orientar investigações adicionais de fatores antivirais e provirais. Em experimentos de eliminação mediados por KO e siRNA, a depleção do principal fator antiviral, EXOC1, aprimorou vários marcadores de replicação do HBV e a análise transcriptômica revelou a ativação das assinaturas dos genes hipóxia e HIF-1. Três fatores provisórios, IRF2, WDR48 e ZCCHC14, foram investigados in vivo usando um modelo de camundongo químico de fígado humano, que demonstrou que ZCCHC14 KO reduziu muito a replicação e disseminação do HBV. Juntas, essas plataformas complementares in vitro e in vivo expandem o catálogo de fatores hospedeiros do HBV e fornecem uma estrutura escalável para a descoberta de novos hospedeiros.

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Telas CRISPR ortogonais e camundongos quiméricos de fígado humano identificam fatores hospedeiros do vírus da hepatite B

Telas CRISPR ortogonais e camundongos quiméricos de fígado humano identificam fatores hospedeiros do vírus da hepatite B

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